產(chǎn)品詳情
簡(jiǎn)單介紹：
NADPH-細(xì)胞色素C還原酶(NCR)測(cè)試盒由上海通蔚科研生物公司提供，通蔚商鋪產(chǎn)品包括NADPH-細(xì)胞色素C還原酶(NCR)含量試劑盒價(jià)格; 規(guī)格; 包裝; 說(shuō)明書(shū); 測(cè)定方法等生化試劑盒的詳細(xì)介紹，歡迎新老客戶前來(lái)選購(gòu)。
詳情介紹：
NADPH-細(xì)胞色素C還原酶(NCR)測(cè)試盒
測(cè)定方法: 微量法
測(cè)定規(guī)格: 100管/96樣
保存條件: 低溫避光保存
有 效 期: 6個(gè)月
注 意: 正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。
測(cè)定意義:
細(xì)胞色素P450酶是一組主要存在于肝臟的同工酶,在外源物質(zhì)代謝中具有重要作用,尤其是和毒物的代謝。NCR作為P450酶系的重要一員,催化氧化型P450還原再生。測(cè)定原理:
NCR催化NADPH還原氧化型細(xì)胞色素C,還原型細(xì)胞色素C在550nm處有特征吸收峰;通過(guò)測(cè)定550nm吸光度的增加速率,來(lái)計(jì)算NCR活性。自備儀器和用品:
普通離心機(jī),超速離心機(jī)、可調(diào)式移液槍、紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板和蒸餾水。粗酶液提取:
1、除去細(xì)胞核和線粒體等:稱約0.5g組織,加入4℃預(yù)冷的1 mL試劑一,冰上充分研磨,10 000g 4℃離心30min,取上清液,轉(zhuǎn)移到超速離心管中。
2、粗制微粒體:4℃,100 000g,離心60min,棄上清液。
3、除血紅蛋白等雜質(zhì):向步驟2的沉淀中加1 mL試劑一,蓋緊后充分震蕩溶解,100 000g離心30min,棄上清液。
4、終微粒體:向步驟3的沉淀中加試劑二0.5 mL,蓋緊后充分震蕩溶解,4℃保存待測(cè)。
NADPH-細(xì)胞色素C還原酶測(cè)定操作:
1. 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30 min,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到550 nm,蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑二在37℃水浴中預(yù)熱30min。
3. 空白管:取微量石英比色皿/96孔板,依次加入10μL蒸餾水、180μL試劑二、10μL試劑三和10μL試劑四,迅速混勻后于550nm處測(cè)定2min內(nèi)吸光值變化, 0s和 30s吸光值?！鰽空白管=A2-A1。
4. 測(cè)定管:取微量石英比色皿/96孔板,依次加入10μL提取液、180μL試劑二、10μL試劑三和10μL試劑四,迅速混勻后于550nm處測(cè)定2min內(nèi)吸光值變化, 0s和 30s吸光值?！鰽測(cè)定管=A4-A3。
注意:空白管只需做一次。
